微生物生长曲线——天生定量

原创 石决明

说明：本篇作为微生物基础与现代技术的第二篇，前篇  从微生物分类到革兰氏染色中的革兰氏染色图是我自己做的，不知道大家有没有看出其中的亮点，在这里说明一下：按照正常染色的结果是革兰氏阴性杆菌，但是在其中发现大量芽孢，就很有可能是菌龄的问题，导致结晶紫没有染上去。

将少量单细胞纯培养接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养，定时取样测定其细菌含量，可以看到以下现象：开始有一短暂时间，细菌数量并不增加，随之细菌数目增加很快，既而细菌数又趋稳定，逐渐下降。如果以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速度为纵坐标作图，可以得到一条曲线，称为繁殖曲线，通常又称为生长曲线。一般的生长曲线见下图。

细菌数目的测定可以用比浊法，类似于麦氏比浊，一般选用紫外分光光度计测定OD600值。

稳定期(stationary phase) 又称恒定期或生长期.处于稳定期的微生物,新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等,整个培养物中二者处于动态平衡,此时生长速度,又逐渐趋向零.而这个过程会持续数小时的时间。这不是天生定量吗？ 也可以说是在稳定期内的定量菌种。

细菌数目的测定可以用比浊法，类似于麦氏比浊，一般选用紫外分光光度计测定OD600值。

稳定期(stationary phase) 又称恒定期或生长期.处于稳定期的微生物,新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等,整个培养物中二者处于动态平衡,此时生长速度,又逐渐趋向零.而这个过程会持续数小时的时间。这不是天生定量吗？ 也可以说是在稳定期内的定量菌种。

必须指出，一条生长曲线的得出是在一定的条件下的。包括：

1.某种菌的一定接菌量，不同菌的生长曲线肯定不一样，我一般用1ml的甘油菌种冻存液

2.新鲜培养基的体积，菌种活化一般用10mlTSB试管

3.培养条件，说到这个就不得不提发酵行业，一般都是微生物生长条件的化。

微生物的生长条件：

1.营养物质：碳源、氮源、微量元素、生长因子（维生素）等

2.水分

3.pH值

4.温度（会有空气浴和水浴的差别，一般认为水浴效果，大型发酵容器还会有内部加热）

5.空气（有一个重要的概念：溶解氧，就是在培养过程中溶解在培养基液体中的氧气。为了提高溶解氧，发酵罐中会有搅拌杆；在一般试管或者摇瓶的培养中是振荡培养，就是在摇床中以150r/min或者200r/min摇摆。）

在一般的药品微生物培养中就是静置培养，从来没有达到的培养条件。在现有的操作中，一般菌种活化需要过夜培养（12h以上，金黄色葡萄球菌时间时间还要更长些）。如果优化现有培养条件，完全有可能缩短迟缓期。举个例子，一些大肠杆菌的模式种（方便接受质粒利于表达）到达稳定期的时间大概在8h，稳定期可以持续4h。