产品介绍:
品名:革兰氏染色液试剂盒
试剂盒组成:
1.结晶紫染色液:5ml×1支
2.碘液:5ml×1支
3.脱色液:5ml×2支
4.沙黄复染液:5ml×1支
原理:
通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇或丙酮脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。
操作方法:
1.准备好革兰氏染色所需试剂、玻片、吸水纸、镊子、接种环、废液缸、洗瓶、去离子水、酒精灯等,待检测的菌株一般应为新鲜培养物;
2.以酒精擦拭玻片,在酒精灯上干燥后,用接种环挑取一环的去离子水或生理盐水到载玻片上,挑取少量纯培养物在水滴上涂抹至均匀分散,将涂片在酒精灯火焰上灭活、固定;
3.加结晶紫溶液1-2滴,染色1分钟,用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗;
4.待干,加革兰氏碘液,作用1分钟,用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗;
5.加脱色液(95%酒精),不时摇动玻片,直至无紫色脱落为止(约10-20秒),用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗;
6.待干,加复染液,复染30秒。用去离子水轻轻从培养物上方流过水洗,待玻片干燥后镜检;
7.油镜镜检。菌体呈紫色者为革兰氏阳性菌;呈红色者为革兰氏阴性菌。
注意事项:
1.培养物要新鲜,以免对结果的判断造成影响;
2.酒精洗脱为关键步骤,不可长时间洗脱,以免对结果判断造成影响;
3.碘液容易挥发,平时应拧紧瓶盖、避光保存;
4.涂片可采用自然风干、干燥箱等方法进行干燥;
5.每一步水洗时,注意不要直接对着涂片冲洗,水流应从上方流经涂片,轻轻水洗