制药用水微生物限度检验漫谈
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水是药物生产中用量大、使用广的一种辅料，用于生产过程和药物制剂的制备。微生物限度检查和TOC、内毒素、电导率等检测都是制药用水质量控制的重要项目。
纯化水检验标准收载于《中国药典》2015年版二部：微生物限度 取本品不少于1ml，经薄膜过滤法处理，采用R2A 琼脂培养基，30～35培养不少于5 天，依法检查（通则1105），1ml供试品中需氧菌总数不得过100cfu。
注射用水检验标准收载于《中国药典》2015年版二部：微生物限度取本品不少于100ml，按薄膜过滤法处理，采用R2A 琼脂培养基，30～35培养不少于5 天，依法检查（通则1105），100ml供试品中需氧菌总数不得过10cfu。
本人根据平常大家关心的一些问题，漫谈一下制药用水微生物限度检测。主要包括以下8个内容，会分多篇文章发布在实验助手app平台，欢迎大家留言交流：
1. 中国药典培养基变化原因。
2. 水中微生物简单分析。
3. 纯蒸汽微生物限度检验必要性。
4. 薄膜过滤法和平皿法区别。
5. 制药用水检验量问题。
6. 制药用水取样环境问题。
7. 培养箱应在洁净区内还是外。
8. 水样培养的相关规定
4.薄膜过滤法和平皿法的区别
微生物计数法一般可分为倒皿法、涂布法和薄膜过滤法。其中制药用水的微生物限度采用薄膜过滤法。
这三个方法互相比较有什么优缺点？倒皿法优点是操作比较方便，计数比较准确，缺点是接种量少，只能采用自制培养基。薄膜过滤法相比平皿法和涂布法，可消除样品可能具备的物质，同时检验量更大，结果能够更全反应样品的染菌情况。对比详情见下表3：
| 薄膜过滤法 | 倒皿法 | 涂布法 | |
操 作 | 使用滤器及滤膜对样品进行过滤集菌。 | 先加一定量的菌液，然后加入培养基，混匀冷却后倒置培养。 | 将培养基冷却后，加一定量的菌液，用涂布器均匀涂布后，待菌液被渗透吸收，倒置培养。 |
特 点 | 以检测更大量的样品，结果更有代表性。 可以冲洗样品，消除样品的抑菌作用。 可采用仪器操作，操作更简便。 | 培养基表面适宜好氧菌，内部适宜兼性厌氧菌培养。操做方便快捷。 接种量为1ml或更多样品。 不可使用预制培养基。 | 培养基适合好氧菌培养。 一次接种量不少于0.1ml样品。 计数不准确，涂布器会沾少许微生物。 可以使用预制培养基。 |
表3薄膜过滤法和平皿法对比表
5、制药用水检验量
一般来说微生物限度试样量应取决于警报行动水平和系统微生物控制能力，以及计数结果的统计可靠性。
纯化水检验量，《中国药典》2015年版规定为不少于1ml，《欧洲药典》并没有明确规定，只是给出了标准是100CFU/mL，考虑到一张膜超过100个菌就不好计数，建议纯化水检验量为1ml，可将1ml纯化水注入到适当水中，然后进行过滤。
注射用水检验量，《中国药典》规定为不少于100ml，《欧洲药典》规定上样量为不少于200ml，《美国药典》规定上样量在250~300ml左右。《FDA高纯水系统检查指南》规定上样量100-300ml 是适宜的。故关于注射用水检验量，100-300ml是适宜的。低于100ml是不能接受的，高于300ml就检验就太耗费时间了。